1 准备工作
1.1 准备仪器
清洗玻璃仪器:玻璃色谱柱、1000ml锥形瓶2个、防爆球、旋蒸瓶、漏斗
清洗顺序:自来水加洗洁精加刷子 自来水 纯水润洗1遍 甲醇润洗至少2遍 吹干/烘干/晾干
细长杆子(至少比柱子长)、棉花、托盘、研钵(可选)、药勺、勺子(外卖送的即可)、洗耳球
洗脱液(极性小用石油醚,极性大用二氯甲烷)、硅胶粉末(100-200目)
2 装柱
用细杆子在柱子底部塞棉花(注意:塞得过紧流速很慢;塞得过少可能会漏硅胶)
把柱子固定在铁架上
取适量硅胶粉(100-200目)于锥形瓶中(注意:一定要戴手套和口罩)(有漏斗最好,没有漏斗用A4纸,A4纸折一道痕迹,先倒在A4纸上,再倒进锥形瓶里)
向锥形瓶中加入洗脱液,使硅胶充分溶胀(可以使劲晃动锥形瓶)(注意:别洒出来了)
向玻璃柱中倒入洗脱液若干(液体高约5cm即可)
在玻璃柱溶液出口下方放置锥形瓶,用于接收洗脱液
打开玻璃柱旋塞,使洗脱液排除下方空气,随后关闭旋塞
将溶胀后的硅胶倒入玻璃柱中(动作要快,尽量一次成型)
如果硅胶不够,要迅速将硅胶粉溶胀于锥形瓶中,然后倒入玻璃柱里
用洗脱液将粘在壁上的硅胶粉冲下去
等待硅胶柱沉降完毕(至少沉降3小时)(下午装柱,沉降一晚,第二天上样最佳)
装柱要装平,如果不平,将洗脱液液面放到距硅胶面1cm左右,然后用洗耳球敲击即可使硅胶面平整
3 上样
将与硅胶粉混合后干燥的含样品硅胶粉缓慢撒入硅胶柱上方(注意:要保持柱上层有洗脱液)
将粘在壁上的粉末用洗脱液冲下去
上样尽量要上平,方法同上
4 加保护层
用硅胶(粗粉)做保护层,将硅胶粉缓慢均匀撒在柱上层(产生气泡也没事)
或者将硅胶粉溶胀后加入
把纱布叠成合适大小,铺到柱子里面
加足量洗脱液至浸没纱布
5 洗脱
打开硅胶柱旋塞,用锥形瓶接收洗脱液
计算柱体积:V=πr^2
第一个柱体积的洗脱液中没有成分,可直接回收
自第二个柱体积开始(包括),之后的洗脱液要过旋蒸
旋蒸产物转移至小瓶子里,之后通过点板判断是否要换下一个梯度
若点板结果显示洗脱液中的产物越来越少时,即可准备更换洗脱液梯度
梯度为100:1 100:3 100:5 100:10 100:30
极性小可用石油醚:乙酸乙酯(纯乙酸乙酯冲柱子)
极性大用二氯甲烷:甲醇(纯甲醇冲柱子)