1 材料
1.1 药品
中药药材
阳性抗菌药：抗生素药敏纸片、青霉素、红霉素、庆大霉素、强力霉素、舒巴坦
1.2 菌种
猪源大肠杆菌(k88、k99)
1.3 试剂
蛋白胨、牛肉膏、琼脂粉
氯化钠、燃烧用酒精、氢氧化钠、盐酸、蒸馏水、医用消毒酒精
1.4 主要仪器
恒温培养箱、无菌操作台、高压锅、天平、电炉、平皿、移液枪
2 方法
2.1 中草药药液的提取
水煎法提取中药药材得到药液,药液浓度为1g/mL
药液在高压灭菌锅内在 121-126 kpa下灭菌 30 min,4 ℃保存备用。
2.2 培养基的制备 常规制备
2.3 菌液的制备及稀释
将实验室保存的猪源大肠杆菌用接种环在超净工作台上酒精灯外焰半径 5 cm周围接种于普通肉汤培养基中,而后倾斜放置于恒温震荡培养箱上于37 ℃的条件下培养 18 h。
之后与标准的麦氏比浊管对照,用无菌生理盐水分别稀释菌液,稀释至与0.5号单位的比浊管浊度相当,将其配成大约1.5 × 10^8^CFU/ mL含菌量的实验用菌液。
2.4 中药抗菌活性的测定
利用平皿打孔法来观察中药材的抗菌活性,测定的抑菌圈直径大小作为衡量抗菌活性大小的依据,观察记录所有三次重复实验的结果,计算其平均值。
2.5 中药最小抑菌浓度( MIC)的测定
梯度稀释法测定中药材的最小抑菌浓度(MIC)
2.6 实验数据的处理
用SPSS软件进行生物学统计分析,计算其单因素方差,结果以X+SD表示,P<0.05为差异显著。