1 材料及细胞
材料：脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）
细胞：小胶质细胞BV2、小鼠单核巨噬细胞RAW264.7
2 细胞培养条件
小鼠单核巨噬细胞RAW264.7：
含有 10% 胎牛血清和 1%青霉素-链霉素的DMEM培养基培养。
培养条件为温度37℃，湿度95%，CO2浓度为5%。
3 原理
脂多糖（LPS）可以诱导细胞产生炎症反应，分泌炎症因子，检测炎症因子的多少即可反映抗炎效果。
检测目标物：
一氧化氮（NO）、 前列腺素E2（PGE2）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、p-IκBα、IκBα、一氧化氮合酶、环氧合酶-2（COX-2）
其他表达检测
血红素加氧酶(HO)-1、红系衍生的核因子2相关因子2
通路检测：
核因子kappa B（NF-kB）信号通路
4 模型构建
应确定LPS的合理用量，过多的LPS产生细胞毒性，过低的LPS无法有效诱导细胞炎症。
以LPS诱导RAW 264.7 细胞为例：
1、96孔板铺板，适应生长12-24h
2、向96孔板中加入不同浓度的LPS诱导细胞24小时
3、使用MTT法检测细胞活力，NO试剂盒测定细胞上清液中NO含量
注：LPS浓度为：0.1 、1 、5 、10 、50 、100 、200 µg/mL
随着LPS 浓度的增大，RAW 264.7 细胞的存活率有所下降
LPS浓度为50200 µg/mL时，细胞活力得到了极显著抑制10µg/mL时，NO释放量较高
加入不同浓度的LPS，细胞的NO释放量均有显著的升高
其中LPS浓度为0.1
综合两项指标，本研究选择LPS的造模浓度为5 µg/mL。
5 检测化合物的细胞毒性
目的：找到化合物的无毒性浓度范围，选定给药浓度
1、96孔板铺板，适应生长12-24h
2、向96孔板中加入不同浓度的化合物处理细胞24小时
3、使用MTT法检测细胞活力
6 检测化合物的抗炎作用
应先用高浓度样品给药进行初步筛选（例如200ug/ml），然后使用低中高三种剂量测试（例如12.5、25、50ug/ml）。
样品预防炎症具体操作：
1、96孔板铺板，适应生长12-24h
2、用不同浓度的样品预处理细胞2-3小时（有时是24小时）
3、加入LPS(1µg/mL)处理24小时
4、试剂盒检测培养液中的炎症因子
样品治疗炎症具体操作：
1、96孔板铺板，适应生长12-24h
2、加入LPS(1µg/mL)处理24小时
3、用不同浓度的样品处理细胞2-3小时（有时是24小时）
4、试剂盒检测培养液中的炎症因子
注：样品用 DMSO 溶剂配制成 200 µg/mL 的母液
注：也可以LPS和样品同时处理细胞24小时