1 Griess法测NO含量
1.1 原理
N0在水溶液中极易氧化成NO2 2-和NO3 3-,NO3 3-可通过镉被还原为NO2 2-。NO2 2-在碱性条件下和磺胺作用生成重氮化合物（重氮盐），再与N1-萘基乙二胺盐酸进行偶联反应（留氮反应），生成有颜色的化合物，通过分光光度法比色，在波长546m下测定吸光度，并制作标准曲线，通过曲线可求得样品中N0含量。
1.2 材料
试剂：NaNO2标准液、1%磺胺、0.1% N-1-萘基乙二胺盐酸、纯水
1.3 制备Griess试剂
Griess溶液A:
N-(1-萘基)乙二胺盐酸0.1g/100ml(水溶解)
保存在0-4°C避光。
Griess溶液B:
将磺胺溶于1g/100ml（5% (v/v)的正磷酸溶解）
保存在0-4°C避光。
Griess工作试剂:
将一份Griess溶液A和一份Griess溶液b混合制备，现用现配
1.4 NaNO2标准曲线的测定：
1.4.1 等比稀释法配置不同浓度的NaNO2标准溶液：
亚硝酸钠(CAS 7632-00-0 分子式：NaNO2 分子量：68.99)
1.4.1.1 配置NaNO2母液
NaNO2母液：100mM（即100u mol/ml）
称取亚硝酸钠x克于50ml离心管中，加入y毫升纯水。
其中，x范围为0.1-0.32克；y=10000x/68.99
0-4°C避光保存
1.4.1.2 配置不同浓度NaNO2标准溶液
标准曲线所需NaNO2浓度为 4uM 2uM 1uM 0.5uM 0.25uM 0.125uM 0.0625uM 0.03125uM
取4mlEP管10支，依次标号a-b、1-8
向a号管加入NaNO2母液（100mM）1ml
向b号管加入纯水990ul及10ul a管溶液
向1号管加入纯水990ul及10ul b管溶液再加1500ul纯水
向2-8号管加入纯水1ml
向2号管中加入1号管溶液1ml
向3号管中加入2号管溶液1ml
依次类推，1-8号管即所需各浓度NaNO2标准溶液
1.4.2 测定不标准曲线
向标准溶液中加入
Griess工作试剂
1.5 样品中NO含量的测定
1、取100 μL样品或亚硝酸盐标准品移液至96孔板中(见注2)。
如果样品的量不足100 μL，则用水或制备样品的培养基调至100 μL。
2、加入100 μL Griess工作液，室温孵育15分钟至显色(见注3)。
3、测量样品和标准品在540 nm处的吸光度(见注释4)。
4、对照亚硝酸盐-标准曲线，计算样品中亚硝酸盐的浓度。
如果只测量亚硝酸盐，标准曲线线性范围可达250 μM。
注2：
样品中可能存在的一些化合物可以抑制亚硝酸盐的重氮化并干扰Griess反应。
这包括还原剂，如半胱氨酸、谷胱甘肽、抗坏血酸、NADH和NADPH。
通过在样品中加入已知数量的亚硝酸盐作为内标，可以确定不同类型样品中干扰化合物的存在。
注3：
Griess工作溶液的各组分分别加入时，可获得较高的吸光度值;
但在处理大量样品时，加入预混Griess试剂更为方便。
如果需要提高灵敏度，则应先加入50 μL N-(1-萘)乙二胺盐酸溶液，然后立即加入50 μL磺胺溶液以增强显色效果。
注4：
在530-570纳米范围内的任何地方都可以用于检测。