真空采血系统对非麻醉大鼠尾静脉重复采血
真空采血系统组成：
双尖针[22 G (0.7 mm x 25 mm)]
塑料支架
一系列带橡胶塞的真空管(2 mL)
图1:2 mL真空采血管(左);22g蝶针(中间);塑料约束架(右)。
采血程序：
1.大鼠预处理：
将大鼠置于塑料约束架中
用温水(20-30°C)清洗尾巴，去除任何可见的污垢或粪便。
将尾部伸直，用70%乙醇擦拭尾部，并用纱布清洁，使静脉通畅。
2.取血：
将蝴蝶针的针尖以约20°的角度插入尾侧静脉(约5mm)，距离尾尖约2-3厘米(约5毫米)(图2)。
将蝴蝶针的橡胶端插入真空采血管中，将血液收集到真空采血管中(图3)。
3.取血后处理：
采血后，取下针头，用纱布轻轻按压穿刺部位15-30秒，使血液停止流动。
然后，把老鼠从塑料束缚架上放出来，放回笼子里。
4.血液样本处理：
使用含有EDTA作为抗凝血剂的管子收集血浆。
轻轻地倒置试管几次，混合血液中的抗凝血剂，并将样本垂直放置在冰上。
5.样本离心：
血样采集管在2000 x g的冷冻离心机中离心10分钟，分离血浆或血清。
6.提取血浆/血清：
使用移液枪吸取血清到另一试管中。
注意：不要干扰红细胞和白细胞层。
收集血清时，使用无抗凝剂的试管。
血清和血浆样品都可以立即使用
或在**-80°C下保存**，保存时间可达一年。
注:成功采血定义为每次采血1.2 mL。
注：最大穿刺时间设定为三次，如果第三次穿刺后总血容量低于1.2 mL，则定义为采血失败。
注：采样时间：从尾静脉穿刺开始 至采血后蝶针取下为止。
注:最大采血量为1.2 mL。
图2:针尖以约20°的角度插入尾侧静脉(约5mm)，距尾尖约2-3 cm。
图3:静脉穿刺成功。
特点：
该系统由内壁涂硅的真空采血管和蝶形针组成。
它基于真空负压原理，允许连续抽血而没有采血的风险，这也减少了污染和溶血的机会。
导管内血样量约为0.3 mL，将针从尾静脉拔出后，导管内堵塞的血液由于真空作用，会流入采集真空管。
这种方法也适用于用较小的穿刺针从体重小于100克的大鼠身上采集血液。
注意点：
以下两个步骤对于成功应用该方法至关重要。
1、尾巴伸直，避免尾巴移动;
2、以20°的角度轻轻穿刺静脉，避免刺穿静脉，保持穿刺针在静脉内。
优点：
安全、可行、易于操作。
该方法对大鼠的伤害最小，采血无需使用麻醉剂，可避免应激反应和麻醉剂对血样的影响。
这种方法可以频繁地从未麻醉的大鼠身上获得足够的血容量。