前言
高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)是目前最为重要的分离和分析技术,是必不可缺少的工具。
由于它采用了新型高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,相对于传统液相(柱)色谱其分离效果更好。
HPLC的优点:
样品适用范围广
可供选择的流动相种类多
便于用作制备色谱
HPLC的特点:
(1)分离效能高,使用新型高效微粒固定相填料,柱效高。
(2)选择性高,高柱效+流动相可控=选择性
不仅可以分析不同类型的有机化合物及其同分异构体
还可分析在性质上极为相似的旋光异构体
(3)检测灵敏度高,检测器大多数都具有较高的灵敏度
如被广泛使用的紫外吸收检测器,最小检出量可达1ng(纳克)
用于痕量分析的荧光检测器,最小检出量可达1pg(皮克)
(4)分析速度快,高压输液泵使其分析时间大大缩短
当输液压力增加时,流动相流速会加快,分析时间仅需几分钟到几十分钟。
(5)样品可回收,由于它主要使用非破坏性检测器
样品被分析后,在大多数情况下,可除去流动相,实现对少量珍贵样品的回收,
亦可用于样品的纯化制备。
缺点:
价格昂贵
要用各种填料柱
容量小,载样量小
分析生物大分子和无机离子困难
流动相消耗大且有毒性的居多
高效液相色谱原理
(1)吸附系数:在液固色谱法中,固定相是固相吸附剂,它们是一些多孔性的
极性微粒物质,如氧化铝、硅胶等。它们的表面存在着分散的吸附中心,溶质分子