前言
以下内容来自四季青官网
要不要对血清进行热灭活?
若非必须,不建议热灭活!
热灭活方法:
一般以56℃、30分钟来处理已解冻的血清
热灭活的目的:
此加热步骤,可以使补体去活化,而补体所参与的反应有:溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。
实验显示,即使对血清进行正确的热灭活处理,对大多数的细胞而言也是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。
而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是”小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者认为是微生物的分裂扩增。
因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。
如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保您的血清的质量。
血清应该如何解冻?
建议将血清从冷冻箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室温下使之全溶。
注意:溶解过程中必须规则地摇晃均匀。
血清应该如何保存?
血清应保存在-10℃~-30(放-20℃冰箱即可长期保存)
若一次无法用完一瓶,建议将血清无菌分装至50ml离心管中,放置在-20℃冰箱保存。
血清有沉淀该怎么办?
最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。(血纤维蛋白是形成凝血的蛋白之一)
这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。
欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以1000转/分~2000转/分稍微离心,上清液即可直接加入培养基内使用。
不建议以过滤的方法去除这些絮状物,因为絮状物极有可能会阻塞滤膜。
建议在使用血清的时候:
注意正确的血清解冻步骤
尽量避免灭活血清
尽量避免长时间的将血清置于高温环境中。
牛血清的主要成份
蛋白质是牛血清中主要成份之一:
除包括可携带金属离子、脂肪酸和激素类蛋白外主要还有白蛋白,球蛋白,纤维粘连素(细胞促进细胞附着),α2巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用);胎牛血清中含胎球蛋白(促细胞附着)转铁蛋白(能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用)。
多肽:血小板促生长因子能促细胞分裂,是多肽家庭的主要成员之一,是主要的促细胞增殖因子;成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,血清中含量虽很少,但对细胞生长也有一定作用。
激素:激素对细胞的作用是多方面的。
胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关。
类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用。
促生长激素:促细胞增殖效应。
氢化可的松:血清中含有定量的该成分,它可能兼有促细胞贴附和增殖作用,但有人证明,血清中的氢化可的松,如细胞密度高时可能有抑制细胞的作用和诱导其发生分化。
其他成份:
氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。
与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意义。
★选择适合自己细胞培养的牛血清的最简单方法
由于胎牛血清的批间差异和细胞种类不同,因此要找到一批适合自己用的胎牛血清的最简单有效的方法是:
在购买牛血清前先试用样品,通过筛选得到自己满意的血清批号,然后把整个项目所需的牛血清一次买足,保持整个项目所需牛血清质量的一致性。
如果实验中途血清用完,在用完之前及时购买血清(建议购买同种品牌和货号),将旧血清逐渐过度到新血清即可。