抗氧化

赵成烨 2023-05-26 23:20:03
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抗H2O2氧化损伤实验:

所需材料:

细胞、DMEM、完全培养基、PBS、3%H2O2、CCK8/MTT
H2O2稀释方法:3%H2O2 10ml+36.34mlPBS 即得46.34ml 5.6 mmol/L H2O2

实验流程

细胞接种于96孔板,密度为每孔 1×104 个,于培养箱中培养过夜
24h后弃去原培养基,按分组加入不同培养基。

空白组:100 μL完全培养基
模型组:100 μL完全培养基
实验组:100 μL含药培养基

于培养箱中孵育24h后,用PBS清洗,空白组加入100 μL完全培养基,模型组和实验组加入100 μL含5.6 mmol/L H2O2的完全培养基 继续孵育 4 h。
弃去所有孔中的上清液,PBS 清洗2次后,采用MTT或CCK8法检测细胞存活率。

羟自由基清除实验

所需材料:

实验流程

精密称取硫酸亚铁、过氧化氢(H2O2)和浓盐酸适量,加超纯水配制成浓度分别为9、8.8 mmol/L和100 mmol/L的溶液;
精密称取水杨酸适量,加乙醇配制成浓度为100 mmol/L的溶液;
上述溶液均避光保存,临用前加超纯水稀释成不同浓度的相应试剂溶液。
精密称取AlCl3·6H2O、醋酸钠、醋酸适量,加超纯水分别配制成浓度为1%、0.2 mmol/L和0.2 mmol/L的溶液。

阳性对照溶液的配制
精密称取VC适量,加60%甲醇配制成浓度为4.36 mg/mL的母液,避光保存,临用前加60%甲醇稀释成不同浓度的对照品溶液;精密称取芦丁适量,加60%甲醇配制成浓度为1 mg/mL的母液,临用前加60%甲醇稀释成不同浓度的对照品溶液。

在96孔板中依次加入60 μL水杨酸(10 mmol/L)、60 μL盐酸(2.5 mmol/L)、60 μL硫酸亚铁(3.6 mmol/L)、60 μL供试品溶液和60 μL H2O2(0.88 mmol/L)。
置入酶标仪中速振荡10 s,37 ℃反应20 min,于510 nm波长处测定样品吸光度AX,
同法测定以60 μL 60%甲醇代替供试品溶液后的空白吸光度A0
和以60 μL超纯水代替H2O2 后的样品本底吸光度AX0,
重复2次,每次6个复孔,计算清除率的平均值。
以清除率(Y)对药物质量浓度(X)进行对数回归,根据对数函数方程求出清除率为50%时样品(S1)的质量浓度(IC50)。另
取阳性对照VC,同法测得其IC50值。

DPPH自由基清除实验

Fe3+还原实验