参考文献
被动吸烟对大鼠Ⅲ期、Ⅳ期压疮创面愈合过程中MMP-9、
TIMP-1水平变化影响的研究
局部冷、热处理对大鼠压疮相关凋亡蛋白及炎性因子
的影响
1 试验动物
SPF级的健康雄性SD大鼠,体重(240-300g)
饲养条件:恒温(18℃24℃),恒湿(45%50%),以及明暗交替各12h。
2 实验器材
圆形铁片,直径大小为15.0mm,厚度为0.3mm,重量为0.6g,经高 压蒸汽消毒灭菌处理;
圆形磁铁,直径大小为15.0mm,厚度为5.0mm,重量为2.6g,1500 高斯的磁通量
扭力天平(精确到小数点后3位)
台式离心机
3 造模方法
3.1 磁铁加压法
大鼠根据缺血再灌注损伤原理,埋置铁片加外用磁铁加压的造模方法,制作大鼠压疮模型。
大鼠禁食禁水8h后根据体重,按每千克体重注射50mg戊巴比妥钠来麻醉大鼠,注射方式为体外腹腔注射
在大鼠背部正中线左侧臀部备皮,范围为4cm×4cm,用5%聚维酮碘消毒后,切一个2cm的切口,用镊子将筋膜和组织钝性分离,直至肌肉暴露出来
将高压灭菌后的铁片放置于肌肉下,然后用手术缝线以单纯间断缝合的方式缝合切口,再用5%聚维酮碘消毒缝合处以防止感染发生。
16-20h恢复期过后,大鼠接受缺血再灌注造模,即在大鼠臀部体外放置磁铁对局部皮肤、肌肉等组织产生压力,加压2小时后取下磁铁,恢复血流半小时再重复以上循环,每天进行5个循环,第二天重复进行,直至出现Ⅲ期、Ⅳ期压疮。
大鼠Ⅲ期、Ⅳ期压疮模型判断标准:
大鼠受压处全层伤口,全层皮肤组织均受到破坏并消失,暴露出皮下组织,但是骨骼、肌腱和肌肉不可见,提示Ⅲ期压疮造模成功;大鼠受压处全层伤口,全层皮肤组织均受到破坏并消失,损伤深达肌肉组织,露出铁片,提示Ⅳ期压疮造模成功。
3.2 砝码加压法
10%水合氯醛 (0.3ml/100g)对大鼠腹腔注射,麻醉后侧卧位固定,在大鼠一侧大腿股薄肌处剪 毛,使皮肤暴露,在此处施加170mm Hg(22.47 kPa)的压力。造模过程为5个缺 血再灌注循环,每个循环包括缺血(施压)2h,再灌注(放松)0.5h。造模时,将 试验环境温度保持在22℃,为保证大鼠的麻醉状态按需补充麻醉药。
4 观测指标和方法
4.1 创面病理改变
在大鼠Ⅲ期、Ⅳ期压疮形成后,分别从各组中随机抓取3只大鼠取创面组织,HE染色后分别在光学显微镜的100倍和200倍视野下观察创面组织的病理学改变。
4.2 大鼠压疮愈合过程中的创面面积
在大鼠Ⅲ期、Ⅳ期压疮愈合的第1天、第3天、第7天和第14天,分别从各组中随机抓取3只大鼠
卡纸法测量压疮创面面积:
从质地均匀的卡纸上选取3个不同位置的区域,并分别剪下1个边长为2cm的正方形纸片,称重后除以纸片的面积,就可以得到纸片每平方厘米面积对应的卡纸重量,再用透明尿酸纸拓出大鼠创面大小后,将透明尿酸纸放到同一卡纸上,画出创面范围后延边缘剪下称重,精确到0.001g。
大鼠压疮创面的面积=创面大小卡纸重量/每平方厘米面积卡纸